【關(guān)鍵詞】  高效液相色譜 質(zhì)譜 多菌靈 農(nóng)藥殘留 水果 蔬菜

    多菌靈(carbendazim)又稱苯駢咪唑44號(hào)，化學(xué)名稱為2-(甲氧基氨基甲酰)苯駢咪唑，是一種廣譜、高效、內(nèi)吸性殺真菌農(nóng)藥， 對(duì)菌核病、炭疽病、枯萎病等都有防治效果，已普遍應(yīng)用于水果蔬菜消費(fèi)。由于其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定， 可以耐久地殘留在果品蔬菜中，招致多菌靈殘留累積，可經(jīng)過食物鏈影響人體安康。研討標(biāo)明， 多菌靈能惹起肝病， 還能招致染色體畸變等病癥［1］。目前測(cè)定多菌靈的剖析辦法主要有液相色譜法［2，3］、分光光度法［4］。高效液相色譜法常用紫外檢測(cè)器，由于其選擇性差，靈敏度遭到限制，不同的樣品必需采用不同的色譜條件，對(duì)檢測(cè)干擾極大，辦法的通用性和耐用性不強(qiáng)。為此，本實(shí)驗(yàn)采用高選擇性、高靈敏度的質(zhì)譜檢測(cè)器，以常見水果蔬菜為研討對(duì)象，樹立了檢測(cè)多菌靈殘留的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用辦法。

    實(shí)驗(yàn)局部

    主要儀器與試劑：1100型高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(agilent科技有限公司)，配在線脫氣機(jī)、四元低壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、電噴霧四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器，儀器控制和數(shù)據(jù)采集剖析運(yùn)用chemstation工作站； 超純水系統(tǒng)(歷元電子儀器公司)，ks-300d 系列超聲波清洗器，300w(科生儀器廠)。r2200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(buchi公司)；甲醇(剖析純)，四氫呋喃、甲醇(色譜純， merck公司) ；nacl、naoh、石油醚(沸程30～60℃)、二氯甲烷(剖析純)；無水硫酸鈉：運(yùn)用前在500℃馬弗爐中灼燒4小時(shí)；hcl(剖析純)；多菌靈規(guī)范品(dr.ehrenstorfer公司)。

    規(guī)范溶液配制：精確稱取規(guī)范品，用甲醇溶解配成濃度為100mg/l的規(guī)范儲(chǔ)藏液。運(yùn)用時(shí)用甲醇逐級(jí)稀釋成濃度為0.020～2.0mg/l的規(guī)范溶液。

    樣品預(yù)處理：精確稱取粉碎混勻后的樣品25.0g于100ml具塞三角燒瓶中，加入50ml甲醇和10ml 0.1mol/l hcl，攪拌均勻，超聲振蕩提取2小時(shí)，用布氏漏斗抽濾，以少量甲醇清洗殘?jiān)喜V液于150ml圓底燒瓶中，在40℃水浴上濃縮，基本除去甲醇。將濃縮液轉(zhuǎn)移至125ml分液漏斗中，加入10ml 0.1mol/l鹽酸和50ml 10% nacl溶液，混合均勻，再加入25ml石油醚劇烈振蕩。靜置分層后，棄去石油醚，水相用2mol/l naoh溶液調(diào)節(jié)ph至6.5～8.5，用二氯甲烷萃取3次，每次20ml。合并二氯甲烷，以無水硫酸鈉干燥，將濾液轉(zhuǎn)移至150ml圓底燒瓶中，在40℃水浴中減壓蒸發(fā)至干，最后用甲醇溶解定容至1.0ml。

    高效液相色譜-質(zhì)譜條件：色譜柱，dikma diamonsil c18 (4.6mm i.d.×250mm，5μm)；流動(dòng)相，4%四氫呋喃水溶液(a)∶甲醇(b)=7∶3；流速，0.6ml/分；柱溫，30℃；檢測(cè)波長，282nm；進(jìn)樣量，10μl。

    質(zhì)譜檢測(cè)選擇正離子選擇離子檢測(cè)(sim)模式，以m/z192和m/z160為定性檢測(cè)離子對(duì)，m/z192為定量檢測(cè)離子，干燥氣為氮?dú)猓魉?0l/分，干燥氣溫度350℃，毛細(xì)管電壓3500v，裂解電壓100v。

 結(jié)果與討論

    樣品前處理?xiàng)l件的選擇：多菌靈是一種兩性化合物，在中性和偏堿性水溶液中溶解度低，微溶于丙酮、乙酸乙酯和氯仿等有機(jī)溶劑。實(shí)驗(yàn)比較了在酸性條件下，甲醇和水提取多菌靈的效果。取空白蔬菜，加入多菌靈規(guī)范溶液，然后分別用水和甲醇提取，同前述辦法凈化。結(jié)果甲醇-鹽酸法回收率高，而水提法回收率不到50%，故選擇醇提法。在甲醇中加入酸液使多菌靈成鹽，用石油醚除去脂溶性物質(zhì)。再加入naoh溶液，調(diào)整ph至6.5～8.5，使多菌靈轉(zhuǎn)成原形，再用有機(jī)溶劑萃取，從而達(dá)到純化、富集多菌靈的目的。

    流動(dòng)相的選擇：實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)以甲醇-水為流動(dòng)相洗脫時(shí)，多菌靈峰型寬而且拖尾。經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，選擇了四氫呋喃作為調(diào)節(jié)劑，使峰型得到改善； 采用4%四氫呋喃水溶液(a)∶甲醇(b)=7∶3。

    質(zhì)譜辦法的優(yōu)化：實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用dad檢測(cè)器在紫外波長282nm下進(jìn)行檢測(cè)，多菌靈信號(hào)被掩蓋，無法精確定量。而用靈敏度和選擇性更高的質(zhì)譜檢測(cè)器在選擇離子監(jiān)測(cè)模式下進(jìn)行檢測(cè)，多菌靈響應(yīng)明顯。與dad檢測(cè)器相比，質(zhì)譜檢測(cè)器采用sim模式后，檢測(cè)靈敏度顯著提高，目標(biāo)物在紫外光下無響應(yīng)，但在質(zhì)譜中有很強(qiáng)的響應(yīng)。同時(shí)質(zhì)譜抗干擾強(qiáng)，檢出限低，定量結(jié)果更趨精確和真實(shí)，辦法耐用性更強(qiáng)；用掃描模式在m/z 120～220范圍掃描。質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子m/z192［m+h］+為基峰，m/z16為［m-ch3o］+，m/z 214為［m+na］+。因此，實(shí)驗(yàn)選取m/z192和m/z160作為監(jiān)測(cè)離子對(duì)進(jìn)行定性，將m/z192用于多菌靈的定量測(cè)定。

    規(guī)范曲線及辦法檢出限：將規(guī)范儲(chǔ)藏液用甲醇稀釋成濃度分別為0.02、0.04、0.10、0.20、0.40、0.80、1.00、2.00、3.00和4.00mg/l的規(guī)范溶液。在相同的色譜及質(zhì)譜條件下，測(cè)定多菌靈的峰面積。以峰面積對(duì)進(jìn)樣濃度作圖，繪制規(guī)范校正曲線。在含量為0.02～4.00mg/l范圍內(nèi)得出規(guī)范曲線，線性回歸方程為y=5.028×107x+2.324×105，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。取空白樣品提取液，加入一定量的多菌靈規(guī)范品，以信噪比的3倍來確定辦法的檢出限為0.12mg/l(rsd

    實(shí)際樣品的測(cè)定結(jié)果：測(cè)定結(jié)果見表1，多菌靈的平均加樣回收率為95.5%～103.2%；最大相對(duì)規(guī)范偏差為4.3%。測(cè)定結(jié)果令人滿意。不同產(chǎn)品中多菌靈的最高殘留限量為0.5mg/kg，本辦法的靈敏度完全可以達(dá)到剖析要求。采用三波長分光光度法測(cè)定水果蔬菜中多菌靈的殘留量，辦法簡單，測(cè)定結(jié)果精確，辦法重現(xiàn)性好。

【參考文獻(xiàn)】
1 張建新,杜雙奎,楊小姣.陜西省主要蔬菜產(chǎn)區(qū)多菌靈農(nóng)藥殘留剖析與評(píng)價(jià).安全與環(huán)境學(xué)報(bào),2005,5(6):78-80.
2 李桂風(fēng),郝征紅,董淑敏,等.花生中多菌靈殘留量的高效液相色譜剖析辦法的研討.剖析測(cè)試學(xué)報(bào),1998,17(3):69-70.
3 bernal j.l.,del nozal m.j,et al.high-performance liquid chromatographic determination of benomyl and carbendazim residues in apiarian samples.journal of chromatography a,1997,787:129-136.
4 默濤,陳鶴鑫,陸貽通,等編著.農(nóng)藥殘留量剖析辦法.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1992:201-203.

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